瘧疾(malaria)是瘧原蟲經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病,臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征,惡性瘧疾能引起兇險(xiǎn)發(fā)作。常見(jiàn)檢測(cè)方法為間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧原蟲抗體。
[檢測(cè)方法]
[方法學(xué)原理] 抗原片上加患者血清,若血清中含有瘧原蟲抗體,即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物,此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合,zui后通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。
[試劑]
1.0.01mol/LpH7.6 PBS
3.陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照血清
4.抗原片
[檢測(cè)步驟]
1.用鉛筆將抗原片(厚血膜)劃成12個(gè)小格,放置蒸餾水中浸泡2~3min,以脫去血紅蛋白,吹干。
2.用無(wú)水乙醇固定10min,吹干。
3.將被檢血清用PBS從1:10開(kāi)始作倍比稀釋,將此稀釋血清分別加在小格中,每格1小滴,同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。
4.將抗原片放濕盒中置37C環(huán)境中孵育30min,棄去殘余血清,用PBS洗3次,每次3min,用蒸餾水漂洗一遍以脫鹽,吹干。
5.將已稀釋的熒光標(biāo)記抗人IgG抗體加于各小格中心,每格1小滴,同上孵育,漂洗吹干,熒光顯微鏡檢。
[結(jié)果判斷] 陽(yáng)性結(jié)果小格內(nèi)有與原蟲胞漿結(jié)構(gòu)相似的明亮熒光;陰性結(jié)果原蟲胞漿結(jié)構(gòu)模糊無(wú)熒光。陰陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果無(wú)誤,實(shí)驗(yàn)成立。
[正常參考值] 正常人抗體效價(jià)≤1:10,但瘧疾流行區(qū)的正常人(成人)抗體效價(jià)稍高。
[注意事項(xiàng)]
1.具有較多裂殖體的血片,陽(yáng)性檢出率高,因?yàn)榀懺x的裂殖體的抗原性zui強(qiáng)。
2.采用厚血膜做抗原片時(shí),經(jīng)溶血后瘧原蟲容易變形,故觀察結(jié)果時(shí)要認(rèn)真辨認(rèn)(必要時(shí)可做瑞氏染色對(duì)照)以排除非特異性熒光。
3.加被檢血清時(shí),要防止互相串格。
[臨床意義] 被檢血清≥1:20陽(yáng)性,表明瘧原蟲感染。流行區(qū)人們抗體陽(yáng)性檢出率較高。有學(xué)者報(bào)道患者抗體陽(yáng)性率為55.1%,明顯高于血膜染色檢查法(陽(yáng)性率28.1%)。間日瘧患者經(jīng)*后熒光抗體的陽(yáng)性率迅速下降。值得注意的是,已*10余年的人群中尚有8%的人存在低滴度抗體水平。由此可見(jiàn),本試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性的意義不在于診斷,而在于流行病學(xué)調(diào)查。