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當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心實(shí)驗(yàn)試劑試劑盒JYM0140Hu人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA Kit

人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA Kit

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA Kit,產(chǎn)品編碼:JYM0140Hu
Human Interleukin 6 (IL-6) ELISA Kit
有效期:6個(gè)月
保存條件:2-8℃

更新時(shí)間:2024-03-19
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人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA Kit,產(chǎn)品編碼:JYM0140Hu

人白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA Kit,Human Interleukin 6 (IL-6) ELISA Kit

產(chǎn)品描述:

【實(shí)驗(yàn)方法】雙抗體夾心法

【種屬】人

【檢測(cè)范圍】 見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

【檢測(cè)波長(zhǎng)】450 nm

【樣本類型】血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本 

【反應(yīng)時(shí)間】 1.5~2h


人白細(xì)胞介素6(IL-6)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供科研使用。 

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)人血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素6(IL-6)的含量。 

有效期:6個(gè)月 

保存條件:2-8℃

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白細(xì)胞介素6(IL-6)水平。用純化的人白細(xì)胞介素6(IL-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素6(IL-6),再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素6(IL-6)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成很終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素6(IL-6)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白細(xì)胞介素6(IL-6)濃度。

試劑盒組成

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樣本處理及要求

1.血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 

3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。 

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 

7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 60 ng/L, 40 ng/L, 20 ng/L, 10 ng/L,5 ng/L)。

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2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品很終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 

3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50ul,空白孔除外。 

4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 

5. 配液:將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用。 

6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。 

7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50ul,再加入顯色劑 B50ul,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘。

8. 終止:每孔加終止液 50ul,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 

9. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 

2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間很好控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,很好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)很后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

6. 底物請(qǐng)避光保存。 

7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 

8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 

9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

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試劑盒性能

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.92 以上。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于 9%和 15%.

檢測(cè)范圍

1pg/ml -70pg/ml


上海寶葉生物科技有限公司

  1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

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