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免疫染色法檢定蛋白質(zhì)

更新時(shí)間:2013-01-16點(diǎn)擊次數(shù):994

方法步驟:
1) 尿素洗過(guò)夜的轉(zhuǎn)印紙?jiān)僖?0 mL PBST 洗三次,每次約10 min,均在上述方形培養(yǎng)皿中進(jìn)行。
2) 轉(zhuǎn)印紙放在明膠NET 溶液中反應(yīng),置室溫中反應(yīng)1 h。一般使用方形培養(yǎng)皿當(dāng)容器,但亦可裝入塑料袋中反應(yīng),較節(jié)省試劑用量。
3) 反應(yīng)后,以PBST 浸洗二次。
4) 把轉(zhuǎn)印紙放在抗體溶液中反應(yīng),置室溫反應(yīng)1 h。
5) 反應(yīng)后以PBST 洗三次,改用酶聯(lián)體反應(yīng),在室溫下反應(yīng)1 h。
6) 以PBST 洗四至五次,注意容器也要洗干凈。
7) 加入DAB 基質(zhì)溶液約10 mL 呈色,盡量避光,并且不時(shí)搖動(dòng)呈色液。
8) 數(shù)分鐘內(nèi)可呈色,在背景加深前倒去DAB,以水沖過(guò)數(shù)次后晾干。

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