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DNA限制酶分析與切割

更新時間:2012-09-07點擊次數(shù):1121

本實驗是以質(zhì)體pBluescript II SK(-) 為材?,以?同限制酶作用,經(jīng)電泳分離DNA片段后,比較各DNA片段的泳動?與分子?,藉此練習(xí)限制酶的使用、電泳分析及簡?DNA限制圖譜 (restriction map) 的建?。 以DNA操作為主的各項實驗必須維持溶液與容器?受核酸分解酵素污染,因此請同學(xué)遵守以下原則并養(yǎng)成習(xí)慣:

 
    a. 請隨時保持實驗桌的清潔。
    b. 微?移液器頭及微?離心管取出后?即將蓋子蓋上。
    c. 請勿用手觸摸滅過菌的微?移液器頭、微?離心管及各種容器的內(nèi)部。
    d. 溶液打開后,蓋子請勿隨意置放。吸取各種溶液請使用滅過菌的微?移液器頭;Pipetman 要保持垂直,?要碰到容器壁;每次吸出溶液后,請?即將蓋子蓋上。
 
    儀器用具:
    37℃及65℃水浴或恒溫槽
 
    藥品試劑:
    質(zhì)體pBluescript II SK (-)
    限制酶:BamHI, PvuII 及ScaI (濃?均為10 units/μL, Invitrogen)
    10×Reaction buffer 6 (0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl)
    無菌水
 
    方法步驟:
    1) 取7 支微?離心管,依下表所?體積 (單位 μL) 依序加于管壁?同位置上。
    ◆ 每次吸取限制酶時,請換一支新的微?移液器頭以免造成污染。
    總體積為20 μL,短暫離心后,以微?移液器頭輕輕混合,#1 置冰浴中,其余各管置于37℃反應(yīng)1 h。
    2) 置65℃水浴15 min 中止反應(yīng)后,移置冰浴?卻,即可進?電泳分析。

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