儀器用具:
微量離心機
冰浴
Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器
UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)
防護面罩
藥品試劑:
限制酶:BamHI, HindIII (20 U/μL, BioLabs)
10×NE Buffer BamHI (0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol)
100×BSA (10 mg/mL bovine serum albumin) 使用前稀釋十倍成10×無菌水
方法步驟:
1) 正反應株,接種于3 mL LB/Amp
培養(yǎng)基,于37℃震蕩培養(yǎng)過夜后,以2.1 的方法抽取質體。
2) 每一株每反應各取3 μL 質體,另取pQE31 及pBlueGus 每反應各3 μL,分別依下表進行HindIII 及BamHI 切割。
3) 以1% agarose gel 進行電泳分析,由電泳圖譜挑選帶有gus DNA 片段的重組質體。
?? 照相后的電泳膠片不要丟掉,可繼續(xù)進行Southern 轉印。
限制酶分析請依照下列表格加入:
# 各管置請于37℃反應至少1 h。